遠慕簡述免疫學ELISA、免疫組化、WB的特性

2023-03-06 03:00:02

ELISA（酶聯免疫吸附試驗）：

用到了免疫學原理和化學反應顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術，這是與免疫組化的主要區別，操作上 開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。

免疫組化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因為所檢測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。

Elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。

免疫組化：

是融合了免疫學原理（抗原抗體特異性結合）和組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來對組織（細胞）內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。

樣本是細胞或組織，要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。

western bolt （wb）：

先要進行SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標記物顯色來檢測樣品，可以用于定性和半定量。

免疫學三大工具，免疫組化、Western bolt （wb）、ELISA，分別用于定位，定性和定量。

western blotting（wb） 可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩：

elisa可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結合，那得到的數值就不可信。

WB只能半定量,但是可以檢測細胞膜蛋白,這點ELISA做不到，ELISA可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響，WB所檢測的一般是抗原，而Elisa抗原抗體都可以檢測。

WB所檢測的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體、降解產物等，一句話，WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的；而Elisa無能為力，一鍋端了。

WB所適用的一抗一般是線性位點的，ELISA線性或構象型抗體都可以使用。

從另一個意義上講，WB可以做抗體是線性位點還是構象型位點的補充判定，而Elisa不行。

WB一次處理量就是一塊膠版，10-20個樣品最多了。

Elisa一塊96孔板一次可以處理96個樣本，可以設置多個復孔、對照、梯度樣等來提高檢測的可信度。

WB操作常見的非特異性條帶，膜本底差，顯色不好等等缺點在Elisa上表現得要好得多。