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      工程知識

      ELISA檢測競爭法操作步驟

      2022-09-27 21:10:24

      競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原,其原理:將特異性抗體包被于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。

      其操作步驟為:

      1. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

      2. 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

      3. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結,由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限,因此當檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結,即所謂競爭法之由來。

      4. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

      5. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。



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